免疫荧光：冷冻切片

• 适用样本： 冷冻切片（RNA检测后或单独使用）
• 版本： v1.0
• 最后修改： 2026-04-03

RNA检测后免疫荧光

本方案适用于完成RNA检测（如PRISM / SPRINTseq）后需要进行蛋白免疫荧光成像的样本，也可作为冷冻切片的独立IF方案使用。

1. 固定

目的：交联蛋白质，保持抗原性和组织形态。

• 固定液： 4% PFA，室温（RT）30 min。

2. 清洗

目的：去除残留固定液。

• 清洗： PBST（PBS + 0.1% Tween-20），5 min × 3 次。

3. 封闭

目的：封闭非特异性抗体结合位点。

• 封闭液： 碧云天免疫荧光封闭液。
• 孵育： 室温 2 h。

4. 一抗孵育

目的：特异性抗原结合。

• 稀释比例： 1:200，使用 Solarbio Quick 一抗/二抗稀释液。
• 孵育： 4°C 过夜。

切勿让切片干燥

确保切片始终被溶液覆盖，使用湿盒孵育。

5. 一抗漂洗

目的：去除未结合的一抗。

• 尽可能吸干一抗溶液。
• 清洗： PBS，15 min × 3 次。

6. 二抗孵育

目的：荧光标记已结合的一抗。

• 二抗： IgG-Alexa Fluor 488 偶联物。
• 稀释比例： 1:200，使用 Solarbio Quick 稀释液。
• 孵育： 室温 2 h，避光。

避光保护

从此步骤起，请保持样品避光，防止荧光团光漂白。

7. 二抗漂洗

目的：去除未结合的二抗。

• 清洗： PBS，15 min × 1 次。

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快速参考

步骤	试剂	条件	时间
固定	4% PFA	室温	30 min
清洗	PBST	室温	5 min × 3
封闭	碧云天封闭液	室温	2 h
一抗	1:200，Solarbio Quick 稀释液	4°C	过夜
漂洗	PBS	室温	15 min × 3
二抗	IgG-488，1:200，Solarbio Quick 稀释液	室温，避光	2 h
漂洗	PBS	室温	15 min × 1